Kilka transporterów zostało zlokalizowanych wzdłuż nefronu metodami fizjologicznymi lub immunocytochemicznymi. Jednak faktyczna obfitość tych cząsteczek nie została ustalona. Aby osiągnąć ten cel, opracowaliśmy metodę ELISA opartą na fluorescencji i wykorzystaliśmy ją do ilościowego oznaczenia białka kanału wodnego Aquapiny-CHIP (AQP-CHIP) w kanalikach nerki szczura. Mikropęcherzykowe kanaliki (2 mm / próbka, permeabilizowane przy użyciu 0,5% Triton X-100) lub oczyszczone standardy AQP-CHIP (0-200 fmol) wykorzystano w protokole fluorescencyjnym ELISA po kowalencyjnym unieruchomieniu na kulkach Sepharose aktywowanych epoksydem. Niższy limit wykrywania wynosił 2,4 fmol AQP-CHIP. Wstępna absorpcja z nadmiarem oczyszczonego AQP-CHIP lub użycie surowicy nieimmunologicznej wyeliminowało sygnał. W segmentach proksymalnych zmierzony AQP-CHIP był liniowo powiązany z długością kanalików (1-10 mm). Zmierzony AQP-CHIP był (średni +/- SE, fmol / mm): S-1 proksymalny, 10,8 +/- 2,1; S-2, 10,0 +/- 2,3; S-3, 21,3 +/- 3,1; typ cienka ręka opadająca (DTL), 12,9 +/- 4,6; typ 2 DTL, 86,5 +/- 19,5; typ 3 DTL, 43,0 +/- 11,2. W cienkich wstępujących kończynach, grubych wstępujących kończynach, dystalnych zakrzepłych kanalikach, łączących kanalikach i zbierających kanałach sygnał AQP-CHIP był nie do odróżnienia od zera. W oparciu o jednostkową przewodność wody pojedynczych cząsteczek CHIP, nasze obliczenia pokazują, że zawartość AQP-CHIP jest wystarczająca do wyjaśnienia przenikalności wody mierzonej w izolowanych kanalikach proksymalnych i segmentach DTL.
[podobne: pokrzywka fizykalna, polipektomia endoskopowa, przetoka odbytu zdjęcia ]
229 words
Ja tam swoje wiem
[..] Artukul zawiera odniesienia do tresci: makijaż permanentny szkolenia[…]
no tak, mam wysokie ciśnienie