Klonowanie molekularne i charakterystyka konstytutywnej syntazy tlenku azotu komórki śródbłonka aorty.

Konstytutywna syntaza tlenku azotu (NOS) komórek śródbłonka istotnie reguluje homeostazę naczyń. W celu lepszego zrozumienia tego enzymu, przygotowano bibliotekę cDNA BOS 5X10 (5) pEF z komórek śródbłonka aorty bydlęcej (BAEC) i przeszukiwano fragmentem BamHI DNA szczurzego mózgu o wielkości 2,8 kb. Stwierdzono, że klon pBOS13 ekspresjonuje aktywność syntazy NO podczas syntezy do komórek COS-7. Analiza sekwencji ujawniła sekwencje zgodne z domenami wiążącymi dla wapnia / kalmoduliny, mononukleotydu flawiny, nukleotydu flawonadeninowego i NADPH. Wydedukowana sekwencja aminokwasowa ujawniła białko o względnej masie cząsteczkowej wynoszącej 133, 286, co stanowi 58% homologiczne do szczurzego NOS móżdżku i 51% homologiczne do mysiego makrofagowego NOS. N-końcowa część białka wykazuje kilka cech charakterystycznych dla komórki śródbłonka NOS. Obejmują one region bogaty w prolinę i kilka potencjalnych miejsc dla fosforylacji kierowanej proliną, jak również potencjalne miejsce substratu dla transferazy acylowej. Hybrydyzacja północna do mRNA z hodowlanego BAEC ujawniła obfitą wiadomość o wielkości 4,8 kb, która nie była zwiększona przez koinkubację z czynnikiem martwicy nowotworu alfa, ale znacznie wzrosła w wyniku ekspozycji na stres ścinający przez 24 godziny. Unikalne cechy syntazy NO komórek śródbłonka, szczególnie w końcowej części aminowej cząsteczki, mogą zapewniać nowe regulacyjne wpływy aktywności enzymu i lokalizacji.
[przypisy: przetoka odbytu objawy, pecherz neurogenny, prohormony skutki uboczne ]