Skip to content

Białko Mózgowe 14-3-3 w płynie mózgowo-rdzeniowym jako marker przenoszenia pasażowalnych encefalopatii gąbczastych

3 tygodnie ago

586 words

Przenoszone gąbczaste encefalopatie stanowią grupę o równomiernie śmiertelnych chorobach neurodegeneracyjnych. Choroby te obejmują chorobę Creutzfeldta-Jakoba i kuru, między innymi u ludzi, 1,2 trzęsawki u owiec i kóz oraz gąbczastą encefalopatię u bydła.3 Gąbczaste encefalopatie charakteryzują się gąbczastą degeneracją mózgu, reaktywną glejozą w korowym i podkorowym istota szara i obecność nieprawidłowej izoformy komórkowego białka prionowego.4 Te zwyrodnieniowe encefalopatie są przenoszone, gdy czynnik zakaźny zostaje eksperymentalnie zaszczepiony zwierzętom laboratoryjnym. Istnieje pilna potrzeba przeprowadzenia testu diagnostycznego przedwczesnego, mogącego zidentyfikować ludzi i zwierzęta z pasażowalną encefalopatią gąbczastą. Taki test może być przydatny u pacjentów z chorobą Creutzfeldta-Jakoba przenoszoną drogą jatrogenną3-5 (zwłaszcza z powodu trudności w odkażaniu czynnika zakaźnego6), jak również u pacjentów z nowym szczepem choroby Creutzfeldta-Jakoba, prawdopodobnie związanym z gąbczastą encefalopatią bydła.7 Do tej pory ostateczne rozpoznanie pasażowalnej encefalopatii gąbczastej wymaga badania histopatologicznego próbki z biopsji mózgu. Biopsja mózgu jest jednak zagrożeniem dla pacjentów i personelu medycznego i może nie być miejscem choroby.
Większość badanych białek płynu mózgowo-rdzeniowego u pacjentów z chorobą Creutzfeldta-Jakoba nie okazała się użyteczna diagnostycznie. 8-11 Jednak dwa białka 30-kD wykryte przez dwuwymiarową elektroforezę i oznaczone białka 130 i 131 dobrze korelują z diagnozą choroby Creutzfeldta-Jakoba , o wysokiej czułości i swoistości.12 Identyfikacja tych białek wyjaśniła rozpoznanie przedwiartemu w kilku trudnych przypadkach, 13-16, ale technika testu nie jest praktyczna dla rutynowego zastosowania klinicznego. Opracowanie prostszego testu wymaga identyfikacji i charakterystyki białek 130 i 131, ale początkowe próby zostały ograniczone przez ich niskie stężenie w płynie mózgowo-rdzeniowym. Postawiliśmy hipotezę, że białka 130 i 131 mogą być obfite w normalnej tkance mózgowej, co ułatwiłoby ich identyfikację i opracowanie testu immunologicznego, który mógłby być przydatny w ustaleniu rozpoznania choroby Creutzfeldta-Jakoba bez potrzeby biopsji mózgu.
Metody
Próbki płynu mózgowo-rdzeniowego
Próbki płynu mózgowo-rdzeniowego od ludzi lub zwierząt z możliwymi diagnozami pasażowalnej encefalopatii gąbczastej lub z dobrze przebadanych kontroli z ustalonymi diagnozami zostały złożone w National Institutes of Health lub w California Institute of Technology. Diagnozy zostały wykonane przez polecających lekarzy lub lekarzy weterynarii zgodnie ze standardowymi kryteriami klinicznymi, a także badania histopatologiczne, odpowiednio i dostępne. Próbki od pacjentów z możliwą chorobą Creutzfeldta-Jakoba przypisano do jednej z trzech kategorii diagnostycznych na podstawie dostępnej informacji klinicznej lub patologicznej: potwierdzonej patologicznie, klinicznie określonej (szybko postępująca demencja, mioklonie i charakterystyczne odkrycia elektroencefalograficzne) lub klinicznie prawdopodobne. (postępująca otępienie, obecność białek 130 i 131 płynu mózgowo-rdzeniowego i mioklonie, ataksja lub charakterystyczne odkrycia elektroencefalograficzne) .17 Wszystkie próbki przechowywano w temperaturze -70 ° C bez środka konserwującego.
Oczyszczanie i charakteryzowanie białek 130 i 131
Przygotowanie próbki, dwuwymiarową elektroforezę i analizę obrazu białek z tkanki mózgowej przeprowadzono w sposób opisany w innym miejscu. [18-21] Plamkę odpowiadającą białku 130 wycięto z elektrobłonionych błon 22 i poddano sekwencjonowaniu aminokwasów zgodnie ze standardowymi metodami. Uzyskane sekwencje aminokwasów porównywano z sekwencjami w banku danych Swiss-Prot przy użyciu podstawowego narzędzia do lokalnego ustalania linii trasowania.
14-3-3 Immunoassay in Cerebrospinal Fluid
Wszystkie testy przeprowadzono bez znajomości diagnoz, a metodę zaadaptowano z metody Brown i wsp.24 Pięćdziesiąt mikrolitrów płynu mózgowo-rdzeniowego wymieszano z 10 .l buforu do próbek (5% glicerolu, 1% 2-merkaptoetanolu, 1% sodu siarczan dodecylowy i ślad błękitu bromofenolowego w końcowym roztworze) i gotowany przez pięć minut
[przypisy: alprazolam, dabrafenib, noni ]
[patrz też: prohormony efekty, prohormony skutki uboczne, przedawkowanie witaminy b12 ]